Микроскопия мазка на дифтерию. Одним из методов ускоренной диагностики дифтерии явля­ется предварительная бактериоскопия патологического материала (слизь из зева или носа и пленки). Такое исследование выполняют только по требованию леча­щего врача. В этих случаях материал берут двумя там­понами, один из которых используют для выделения культуры возбудителя, а другим делают несколько маз­ков для бактериологического исследования. Мазки окрашивают щелочным раствором метиленового синего по Леффлеру или другими способами.

При положительных результатах под микроскопом среди банальной (преимущественно кокковой) микро­флоры зева и носа видны дифтерийные палочки, рас­положенные под углом друг к другу. Дифтерийные палочки полиморфны, часто утолщены на концах, не­равномерно окрашены. На концах палочек имеются зер­на волютина (тельца Бабеша—Эрнста), окрашиваю­щиеся темнее, чем остальное тело палочки, что осо­бенно хорошо выявляется при окраске по Нейссеру (тело палочки светло-коричневое, а зерна волютина темно-синие).

При микроскопии мазка дифтерийную палочку сле­дует дифференцировать от ложнодифтерийной (палоч­ка Гофмана), которая характеризуется отсутствиемполиморфизма, равномерным окрашиванием (отсут­ствие зерен волютина), параллельным расположениемпалочек.

Бактериоскопическое исследование должны прово­дить опытные специалисты, поскольку в предваритель­ном мазке типичные дифтерийные палочки редко встре­чаются в достаточном количестве. Не всегда помогает и окраска второго мазка по Нейссеру. Примерно у по­ловины больных дифтерией можно обнаружить возбудителя, таким образом, однако это не позволяет уста­новить вид коринебактерий, их тип и токсигенность. Вместе с тем надо помнить, что положительный резуль­тат предварительного исследования очень ценен для ле­чащего врача. Кроме того, при бактериоскопическом исследовании можно выявить возбудителя ангины Си-мановского — Плаута — Венсана (спирохеты и вере­тенообразные палочки) и микотической ангины, а тем самым провести дифференциальную диагностику этих двух заболеваний и дифтерии.

После бактериоскопии мазка обязательно проводит­ся бактериологическое исследование материала. Цель его — выделить культуру возбудителя и изучить ее свойства с обязательным определением токсигенности.

Приготовление мазка и толстой капли крови при малярии.Основной метод лаборатор­ной диагностики малярии — обнаружение эритроцитарных паразитов в толстой капле или мазке крови. В практической работе исследуют преимущественно толстые капли, так как за один и тот же промежуток времени в толстой капле можно просмотреть в 30— 50 раз больший объем крови, чем в мазке, а, следова­тельно, и количество плазмодиев в ней больше. К мазку обращаются лишь в тех случаях, когда видовую при­надлежность найденных паразитов по толстой капле установить не удается. Для выявления возбудителей малярии кровь берут при первом же подозрении на эту инфекцию независимо от температуры тела (лучше всего во время лихорадки или сразу после озноба), по­скольку паразиты циркулируют в крови и в интервале между приступами.

Предметные стекла, на которых готовят препараты, должны быть хорошо вымыты и обезжирены. Кровь бе­рется с соблюдением правил асептики. Кожу пальца протирают спиртом и прокалывают простерилизованной иглой-копьем или толстой инъекционной иглой.

Если кровь из мякоти пальца вытекает плохо, то боль­ного просят сделать несколько энергичных движений рукой, кистью и слегка массируют палец. Первую вы­ступившую каплю крови вытирают сухой ватой, затем палец поворачивают проколом вниз и ко второй капле прикасаются предметным стеклом.

Тонкие мазки крови приготавливают по методике, общепринятой для гематологических исследований. Ма­зок не должен доходить ни до конца, ни до краев пред­метного стекла. Поэтому капля крови должна быть диаметром не более 2—3 мм. Предметное шлифован­ное стекло, которым делается мазок, должно быть уже стекла, на которое наносят мазок. Для этого углы шлифованного стекла обламывают пинцетом. В целях приготовления мазка шлифованное стекло ставят перед каплей крови под углом 45° и продвигают вперед до соприкосновения с ней. Когда кровь равномерно распределится между обоими стеклами, быстрым дви­жением делают мазок.

Для приготовления толстой капли крови на пред­метное стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм. Эту каплю размазывают иглой или углом пред­метного стекла в диск диаметром 10—15 мм. Толщина капли должна быть такой, чтобы сквозь нее можно было читать газетный шрифт. Мазки не должны быть тол­стыми, поскольку после высыхания они растрескива­ются и отстают от стекла. Обычно на стекло наносят 2—3 капли на некотором расстоянии одна от другой. Взятые капли должны быть отмечены. На обратной стороне стекла восковым карандашом указывается фа­милия больного или соответствующий регистрацион­ный номер.

Очень удобно наносить толстую каплю на влажный толстый мазок крови. В этом случае капля самостоя­тельно растекается в правильный диск. Простым каран­дашом на мазке делается маркировка препарата. Такой препарат удобен еще и тем, что в мазке довольно хо­рошо сохраняется часть пораженных эритроцитов, а это важно для уточнения вида паразита. Преиму­щество данного метода в том, что капля, нанесенная на мазок, удерживается более прочно, чем нанесенная непосредственно на стекло.

Приготовленные толстые капли высушивают при комнатной температуре не менее 2—3 ч без какого-либо дополнительного подогревания во избежание фиксации крови. После высыхания капли на нее наливают крас­ку Романовского — Гимзы, разведенную как обычно (2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). Продолжительность окраски в среднем составляет 30— 45 мин. Окрашенную каплю осторожно ополаскивают водопроводной водой (сильная струя может смыть каплю) и просушивают в вертикальном положении. Фильтровальной бумагой ее высушивать нельзя. При окраске капли в водных растворах красок происхо­дит выщелачивание гемоглобина из эритроцитов, вслед­ствие чего в окрашенной капле эритроциты уже не видны. Из форменных элементов сохраняются лейкоци­ты и тромбоциты.

Мазки фиксируют, помещая их на 3 мин в метиловый или на 10 мин в 96 % этиловый спирт. Зафиксирован­ные препараты высушивают на воздухе, защищая от пыли и мух. Потом препараты помещают в специаль­ный контейнер и окрашивают азур-эозиновым краси­телем по Романовскому — Гимзе на протяжении 20— 30 мин.

По истечении этого срока контейнер подставляют под слабую струю воды и промывают. После того как из контейнера польется неокрашенная вода, остатки ее сливают и промывают еще раз. Не рекомендуется сна­чала сливать краску, а затем промывать мазок водой, поскольку пленка, образовавшаяся на поверхности кра­сителя, может попасть на препараты и оказаться при­чиной диагностической ошибки. Капля на мазке окра­шивается так же, как толстая капля.

Промытые препараты высушивают и исследуют под микроскопом. В зараженных эритроцитах видны плаз­модии малярии с голубой цитоплазмой и ярко-крас­ным ядром. Нахождение плазмодиев малярии в крови больного является неоспоримым доказательством бо­лезни.