При исследовании лактонов методом тонкослойной хроматографии в качестве адсорбентов используется оксид алюминия IV степени активности или силикагель. Подвижной фазой могут служить следующие системы растворителей: бензол - этанол (9 : 1), бензол - метанол (9 : 1), бензол - бутанол (9 : 1), гексан - этилацетат (85 : 5), хлороформ - метанол (7 : 3), хлороформ - этилацетат (9 : 1), петролейный эфир - хлороформ - этилацетат (2 : 2 : 1), петролейный эфир - бензол - хлороформ (5 : 4 : 1) и др.

Проявляют хроматограммы чаще всего 1% раствором перманганата калия в 1 % растворе серной кислоты. Однако данный проявитель не специфичен для лактонов, так как с его помощью могут быть определены н другие ненасыщенные вещества. Из других проявителей можно отметить 1 % раствор ванилина в концентрированной серной кислоте и серную кислоту при нагревании.

3.6. Методы выделения и разделения сесквитерпенопых лактонов

Унифицированного метода выделения сесквитерпеновых лактонов не существует. В каждом отдельном случае, необходим конкретный подход. Значительное количество лактонов выделено хлороформом с последующим разделением полученного экстракта после удаления растворителя колоночной хроматографией.

В некоторых случаях малополярные лактоны извлекают петролейным эфиром (гексаном или гептаном). Сильнополярные соединения можно извлекать полярным растворителем (ацетоном или спиртом), в этих случаях сырье рекомендуется обезжирить предварительной экстракцией петролейным эфиром. Ацетоновые или спиртовые извлечения после удаления растворителя и разбавления водой необходимо подвергнуть фракционированию растворителями с увеличивающейся полярностью (петролейным эфиром, хлороформом, ди-этиловым эфиром), в полученных извлечениях следует искать лактоны методом ИК - спектроскопии. Для хроматографической очистки и разделения g - лактонов путем колоночной хроматографии чаще всего используют нейтральный оксид алюминия (IV ст. акт., реже III) или силикагель. Лактоны элюируют растворителями с увеличивающейся полярностью или их смесями различных соотношениях [Рыбалко К. С., 1978].

3.7. Выделение сесквитерпеновых лактонов из листьев лопуха войлочного

300 грамм измельченных листьев лопуха помещают в колбу емкостью 5 л, добавляют 2 л хлороформа и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течении 1 часа. Хлороформное извлечение процеживают и процесс повторяют 3 раза.

После чего растворитель отгоняют, остаток трижды обрабатывают 60% - ным этанолом по 50 мл.

Полученную смесь фильтрованием через бумажный фильтр отделяют от осадка, разбавляют 100 мл воды и подвергают трехкратной экстракции хлороформом по 30 мл.

Хлороформное извлечение фильтруют через бумажный фильтр с безводным натрия сульфатом, растворитель отгоняют и в остатке получают порошок черного цвета.

3.8. Хроматографическое исследование суммы лактонов из листьев лопуха войлочного

Полученную смесь подвергают разделению колоночной хроматографией. Используются колонки (30 * 0.5) с 12 г силикагеля L 100 / 250 для хроматографии (Chemapol, Чехословакия), в качестве элюента применяется бензол с постоянным добавлением этилацетата, объем фракции составляет 50 мл, растворитель отгоняется.

Результаты колоночной хроматографии отражены в таблице № 9.

Таблица № 9

Результаты колоночной хроматографии хлороформного извлечения из листьев лопуха