Микроклональное размножение Ириса Низкого путем изолирования зародыша как способ сохранения вида
Рефераты >> Биология >> Микроклональное размножение Ириса Низкого путем изолирования зародыша как способ сохранения вида

· Спиртовка

· Автоклав

· Штатив

· Фильтровальная бумага

2.5 Личный вклад

Автор работы принял личное участие в сборе полевого материала и лабораторных исследованиях под руководством научного сотрудника ГУ « Волгоградский региональный ботанический сад» Ю.Б. Утц и благодарит за предоставленную возможность проведения исследований директора ГУ «Волгоградский региональный ботанический сад» О.И. Короткова.

2.6 Результаты исследований и обсуждение

В качестве первичного материала для введения в культуру in vitro нами были использованы изолированные зародыши.Предварительно обрабатывали их 95%-ным этиловым спиртом в течение 50-60 секунд. В качестве стерилизатора использовали 3%-ый «Лизоформин» (действующие вещества: глутаровый альдегид, глиоксаль и дидецилдиметиламмоний хлорид). «Лизоформин» применяется для дезинфекции медицинских изделий и обладает не только бактерицидными, фунгицидными и спороцидными, но и вирулицидными свойствами, что является важным моментом для получения стерильных эксплантов.

О О

С–СН2–СН2–СН2–С

О

О

Н Н

Глутаровый альдегид С–С Сl-

Н Н С10Н4 + СН3

Cl

Глиоксаль N

С10Н4 СН3

дидецилдиметиламмоний хлорид

Схема 1. Молекулярная структура действующих веществ Лизоформина.

Оптимальное время стерилизации 7-10 мин. Поверхностно простерилизованные и промытые семена высаживали в чашки Петри на агаризованную питательную среду Мурасиге – Скуга без добавления фитогормонов. Основная часть семян прорастала на 7 – 10-е сутки, остальные на 13 – 15 сутки с момента помещения их на питательную среду. Полученные проростки в асептических условиях расчленяли на фрагменты и переносили для роста и размножения на питательную среду Мурасиге – Скуга с добавлением 0.5 мг/л 6-БАП.

Для оптимизации состава среды на этапе микроразмножения к питательной среде, содержащей минеральные соли по Мурасиге и Скугу, добавляли в различных концентрациях 6-БАП (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), зеатин (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), кинетин (1.0; 2.0; 5.0 мг/л) и для вытягивания побегов гибберелловую кислоту (0.2 и 0.4 мг/л). При этом снимались следующие показатели:

1. Коэффициент размножения – количество растений, развившихся из одного экспланта;

2. Количество аномальных (витрифицированных) растений;

3. Количество листьев;

4. Высота растения.

Таблица №1. Влияние гормона зеатина на регенерацию и рост побегов Майкарагана волжского.

1-ая повторность

гормон

Концентрация, мг/л

В начале пассажа

В конце пассажа

h2-h1

Кол-во листьев2-кол-во листьев1

   

h1

Кол-во листь

ев1

h2

Кол-во листьев2

Коэф. размноже

ния

   
   

3.2

1

3,7

2

1

0,5

1

 

0,5

3

2

3,3

3

1

0,3

1

   

1,5

1

1,9

1

1

0,4

0

   

3,5

1

4,2

4

1

0,7

3

   

1,8

2

2,8

4

3

1

2

зеатин

Среднее значение

2,6

±

0,4

1,4

±

0,2

3,2

±

0,4

2,8

±

0,6

1,4

±

0,4

0,6

±

0,3

1,4±0,5

   

1,2

1

1,5

1

1

0,3

0

   

3

1

3,2

5

1

0,2

4

 

1

0,5

1

0,9

1

1

0,4

0

   

3,8

1

4,7

4

1

0,9

3

   

4,5

1

5,4

7

1

0,9

6

 

Среднее значение

2,6

±0,8

1

3,14±0,9

3,6

±1,2

1

0,54

±0,2

2,6±1,2

   

1,2

1

1,6

1

1

0,4

0

   

1,7

1

1,9

1

1

0,2

0

 

0,1

3,2

3

4

5

1

0,8

2

   

2

1

2,4

3

1

0,4

2

   

4

1

4,1

1

1

0,1

0

 

Среднее значение

2,4

±0,5

1,4

±0,4

2,8

±0,5

2,2

±0,8

1

0,4

±0,1

1

±0,3


Страница: