Получение трансгенных животных
Рефераты >> Биология >> Получение трансгенных животных

В сочетании с пересадкой трансформированных половых клеток в семенники реципиентов и успешным протеканием сперматогенеза подход может быть использован для получения трансгенного потомства.

Не смотря на хорошие результаты в использовании сперматозоидов для получения трансгенных мышей, а так же отдельные успешные попытки получения трансгенных свиней и КРС [Gandolfl et al, 1989, Schelander et al, 1995, Sperandio et al, 1996], каких-либо значительных успехов в получении трансгенных сельскохозяйственных животных с помощью трансформированных сперматогониев и спермиев до настоящего времени достигнуто не было. Достижения в использовании трансгенных технологий.

Год

Событие

Автор

1971

Доставка чужеродной ДНК в ооциты кролика сперматозоидами

Bracket

1974

Получение трансгенных мышей с помощью вирусных векторов

Jaenish, Mintz

1976

Передача трансгена по наследству

Jaenish

1980

Получение трансгенных мышей микроинъекцией

Gordon

1981

Получение стволовых клеток

Ewans, Kaufman, Martin

1984

Эмбриональные химеры из клеток тератокарциномы

Bradley

1985

Получение трансгенных сельскохозяйственных животных

Brem, Hammer

1986

Эмбриональные химеры с использованием ЭСК

Получение овец посредством пересадки ядер

Gossler,

Willadsen

1987

Гомологичная рекомбинация в ЭСК

Получение КРС методом пересадки ядер

Thomas, Capeccha

Brather

1988

Получение кроликов методом пересадки ядер

Slice и Robl

1989

Генный таргетинг у мышей

Получение трансгенных мышей и свиней с помощью спермиев в качестве векторов Получение трансгенного КРС методом микроинъекции

Получение свиней методом пересадки ядер

Thompson el al.,

Lavitrano el at.,Gandolfi et al.

Roschlau el al., Prather et al.,

1995

Получение трансгенного КРС с помощью спермиев

Schelander et al

1996

Получение овец методом пересадки ядер культивируемых эмбриональных клеток

Получение ЭСК приматов

Campbell

Thomson

1997

Получение овец методом пересадки ядер фетальных клеток и соматических клеток взрослого животного

Получение трансгенных овец методом пересадки ядер трансформированных культивируемых клеток

Получение химерных трансгенных свиней, с использованием ПЗК

Wilmutetal,

Schnieke

Piedrahita

1998

Получение трансгенного КРС методом пересадки ядер трансформированных фетальных фибробластов

Получение трансгенного КРС с использованием псевдотипных ретровирусных векторов Получение ЭСК из бластоцист человека Получение мышей методом инъекции в цитоплазму ядер кумулюсных клеток

Получение КРС методом пересадки ядер дифференцированных клеток

Cibelli

Chan

Thomson

Wakayama

Kato

1999

Получение трансгенных мышей методом коинъекции ооцитов спермиями и экзогенной ДНК

Perry

2000

Получение свиней методом пересадки ядер соматических клеток (клетки гранулезы)

Polejaeva

2. ФАКТОРЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ ТРАНСГЕНОВ В ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ

Наряду с низкой эффективностью большинства методов трансгенеза основным лимитирующим фактором получения трансгенных является случайный характер интеграции трансгена в геном. На экспрессию трансгена в организме животных оказывают влияние последовательности, прилегающие кв участку интеграции, что является причиной большой вариабельности уровня экспрессии. Уровень синтеза трангенного продукта может варьировать у различных животных от эктопного до слабого или даже находится ниже порога детекции.

Влияние участка интеграции на уровень и характер экспрессии объясняется так называемым позиционным эффектом [Wilson era/., 1990, Sippel et al., 1997). Кроме того, ограниченные знания регуляторных последовательностей большинства генов приводят к использованию зачастую полностью не охарактеризованных геномных фрагментов, что и является причиной низкой эффективности экспрессии в экспериментах по переносу генов [Palmlter, Brinster, 1986].

Для того чтобы преодолеть позиционный эффект и таким образом увеличить вероятность оптимальной экспрессии трансгенов, интегированных в случайной локализации, был применен целый ряд различных стратегий.

Первым таким подходом, позволившим увеличить уровень экспрессии, являлось введение в генные конструкции гомологичных интронных последовательностей.

Положительное влияние на уровень экспрессии трансгенов оказывало введение в генные конструкции S/MAR-элементов

Наиболее удачным решением проблемы преодоления позиционного эффекта явилось интеграция в определенный участок генома посредством гомологичной рекомбинации в эмбриональных стволовых клетках, так как это обеспечивает контроль трансгенной конструкции всеми регуляторными последовательностями, присутствующими в выбранном эндогенном локусе. Оптимальная локализация трансгенов в геноме клетки хозяина может быть выбрана исходя из уровня и характера экспрессии экспериментального трансгена. Еще одним подходом, позволившим дайной интеграции трансгена в геном хозяина является включение в генные конструкции всех регуляторных элементов, ответственных за его экспрессию. Стандартные плазмидные, космидные или фаговые векторы в большинстве случаев не могут быть использованы, вследствие их ограниченной емкости. Данная стратегия может быть использована с применением векторов типа искусственных хромосом, обладающих повышенной клонирующей способностью.


Страница: