- определение относительного и абсолютного числа лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови;

- тесты иммунофенотипирования, а также Е- и ЕАС-розеткообразования для определения относительного и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов;

- определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов основных классов (Ig A, Ig M, Ig G);

- определение фагоцитарной активности лейкоцитов.

Указанные методы в большинстве своем доступны практическим лабораториям клинической иммунологии. Использование этих тестов в повседневной практике клинического иммунолога дает возможность подтвердить либо отвергнуть предположения о нарушении функционирования иммунной системы.

Т е с т ы II у р о в н я - аналитические. Следует отметить, что во многих лабораториях методы розеткообразования фактически потеряли актуальность и заменены наиболее современными и объективными методами определения фенотипа Т- и В-клеток.

Аналитические тесты рекомендуется применять для углубленного анализа состояния иммунной системы, определения уровня и выраженности нарушений в иммунной системе.

Эти тесты доступны лишь хорошо оснащенным, специализированным иммунологическим лабораториям.

К ним относятся:

1. определение субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов с помощью моноклональных антител (Т-хелперы, Т-супрессоры);

2. тест торможения миграции лейкоцитов с использованием в качестве стимулятора ФГА (фитогемагглютинина);

3. оценка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов на митогены, антигены, аллогенные клетки;

4. оценка активности киллерных лимфоцитов (К- и ЕК-клетки);

5. выявление циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК);

6. определение различных компонентов комплемента;

7. оценка различных этапов фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов;

8. тесты по определению медиаторов иммунной системы, в том числе продукции и рецепции интерлейкинов;

9. анализ генов, ответственных за экспрессию иммунологически значимых молекул.

Нами указана лишь часть методов углубленного исследования функции иммунной системы. Наиболее полно иммунологические методы исследования представлены в недавно изданном группой авторов - В.Н.Федосеева, Г.В.Порядин, Л.В.Ковальчук, А.Н.Чередеев,В.Ю.Коган - "Руководстве по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях", М., 1993, 320 с.

Комплекс тестов I и II уровней.

I уровень:

- количество лейкоцитов (относительное, абсолютное);

- количество лимфоцитов (относительное, абсолютное);

- Т-лимфоциты (CD3, Е-РОК);

- В-лимфоциты (CD19, ЕМ-РОК, ЕАС-РОК);

- Ig M, Ig A, Ig G (по Манчини);

- фагоцитоз частиц латекса (фагоцитарный индекс, показатель фагоцитоза).

II уровень:

- Т-лимфоциты (моноклональные антитела, проточная цитометрия);

- Т-хелперы (CD4);

- Т-супрессоры (CD8);

- В-лимфоциты (CD20);

- NK-лимфоциты (CD16);

- Ig E (ИФА);

- антитела к антигенам, аллергенам (ИФА);

- РБТЛ;

- ЦИК;

- другие методы.

В практической работе врачу-иммунологу постоянно приходится решать вопросы о характере функционирования отдельных звеньев иммунной системы человека. С учетом возможностей иммунологических лабораторий на местах можно рекомендовать следующий перечень тестов.

П е р е ч е н ь т е с т о в о ц е н к и о т д е л ьн ы х з в е н ь е в и м м у н н о й с и с т е м ы

Т-клеточное звено иммунитета :

1) исследования с помощью моноклональных антител (МКАТ) (CD2, CD3, CD4, CD8) в том числе активированных Т-клеток;

2) Е-розеткообразования (Е-РОК);

3) нагрузочные тесты с теофиллином (теофиллин-резистентные клетки - ТФР-РОК; теофиллин-чувствительные клетки - ТФЧ-РОК). Имеют относительное значение, не путать с регуляторными субпопуляциями - Т-хелперами и Т-супрессорами;

4) РБТЛ с митогенами (ФГА - фитогемагглютинин);

5) РТМЛ с ФГА, антигенами, аллергенами;

6) продукция лимфокинов;

7) рецепция интерлейкинов;

В-клеточное звено иммунитета:

1) исследования с помощью моноклональных антител (CD19, антитела к поверхностным иммуноглобулинам);

2) ЕАС-РОК;

3) ЕМ-РОК (Е-розеткообразования с эритроцитами мышей);

4) уровень Ig A, Ig M, Ig G (реакция Манчини);

5) уровень Ig E (ИФА);

6) определение специфических антител к инфекционным и неинфекционным антигенам (ИФА);

7) определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Эффекторные факторы иммунной системы:

1) определение фагоцитарной активности нейтрофилов по захвату частиц латекса, либо с микроорганизмами (стафилококк и др.);

2) определение окислительно-восстановительной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ);

3) оценка рецепторного аппарата фагоцитов (МКАТ);

4) определение различных компонентов комплемента;

5) оценка миграционной активности лейкоцитов человека;

6) естественные киллеры (CD16, цитотоксический тест), К-клетки.

Иммунорегуляторное звено:

1) Т-хелперы (CD4), Т-супрессоры (CD8);

2) иммуноцитокины.

В 1981 и 1988 гг. экспертами ВОЗ/МСИО были опубликованы соответственно 1-е и 2-е информационные письма о тестах, используемых в лабораториях клинической иммунологии для оценки иммунной системы человека.

Приведем выдержки из последнего сообщения, касающиеся оценки ряда общеизвестных тестов. Указанное сообщение было опубликовано в журнале "Иммунология", 1990, N2, с. 72-76.

В указанных отчетах отражены следующие положения:

1. Общая характеристика новых тестов.

2. Методические ошибки.

3. Показания к применению тестов, в частности, соответствие их следующим критериям:

а) существенность для постановки диагноза;

б) полезность при ведении больного или использование с исследовательскими целями;

в) минимальная клиническая ценность.

Далее мы приводим характеристику тестов, чаще других используемых в иммуноаллергологической практике:

О ц е н к а и м м у н о г л о б у л и н о в

Для количественного измерения иммуноглобулинов в сыворотке крови (Ig G, Ig A, Ig M) используется метод радиальной иммунодиффузии. Он также позволяет определять субклассы Ig G.

На основе моноклональных и поликлональных антител разработаны и другие методы определения иммуноглобулинов: рокетный иммуноэлектрофорез, ИФА, турбидометрия, нефелометрия.

Уровни сывороточных иммуноглобулинов, характерные для взрослых (Ig M, Ig G1, Ig G3), достигают нормальных значений уже в раннем постнатальном периоде; уровень Ig G2, Ig G4, Ig A не достигает нормальных цифр даже в период полового созревания.

Распределение субклассов Ig G в сыворотке крови взрослого человека следующее:

- Ig G1 - 60-65%;

- Ig G2 - 20-25%;

- Ig G3 - 10-20%;

- Ig G4 - 10-20%.

Наиболее часто у больных имеется ассоциация дефицитов Ig G2,Ig G4, Ig A, Ig E.

Определение уровня субклассов Ig G существенно при повышенной чувствии-тельности к бактериальным инфекциям; дефициты установлены практически для всех иммуноглобулинов, наиболее существенным среди которых является дефицит Ig G2; часто дефицит Ig G2 сочетается с полным отсутствием Ig A.