CuSO4 + 4NH4OH = [Cu(NH3)4]SO4 + 4Н2О

Выбор светофильтра. В пробирке смешивают 2 см3 1 %-ного раствора сульфата меди, 1 см3 5 %-ного водного аммиака и 2 см3 воды, встряхивают и измеряют интенсивность образовавшейся окраски при разных светофильтрах (длинах волн) с целью уточнения максимума поглощения. Данные заносят в таблицу, строят график изменения оптической плотности от длины волны и выбирают для работы светофильтр, при котором оптическая плотность раствора максимальна:

Построение калибровочной кривой. Из 1,0%-ного исходного раствора сульфата меди готовят растворы с меньшей концентрацией по схеме:

Раствор Концентрации сульфата меди, мг/мл

1.Исходный раствор . 10

2.9см3 (1)+ 1см3 воды 9

3.8см3 (1) + 2см3 воды . 8

4.7см3 (1) + Зсм3 воды 7

5.6см3 (1) +4см3 воды . 6

6.5 см3 (1) + 5 см3 воды 5

7.4см3 (1) + 6см3 воды 4

8.Зсм3(1) + 7см3 воды . 3

9.2 см3 (1) +8 см3 воды . 2

10.1 см3 (1) +9см3 воды 1

Содержимое пробирок перемешивают, отбирают 2 см3 испытуемого раствоpa, добавляют 1 см3 раствора аммиака и 2 см3 воды. Пробирки встряхивают и измеряют интенсивность образовавшейся окраски на ФЭКе при выбранном светофильтре, строят калибровочную кривую. Работа по построению кривой дублируется 2 .3 раза. При этом используются те же растворы сульфата меди.

Определение способности пектина связывать ионы меди. В ряд пробирок вносят испытуемые растворы в количествах:

Содержимое пробирок перемешивают. Образующиеся в них oсадки отделяют фильтрованием и измеряют на ФЭКе при выбранном светофильтре оптическую плотность каждого образца фильтрата, расчет содержания меди ведут по калибровочной кривой.

Способность крахмала связывать ионы меди. В ряд пробирок вносят испытуемые растворы в количествах:

Далее поступают, как в 1 опыте. Делают графические построения.

2. 5.Хроматографическое определение бензойной и сорбиновой кислот

Метод основан на извлечении бензойной кислоты (БК) и сорбиновой кислоты (СК) из пищевых продуктов перегонкой с паром или экстракцией органическим растворителем с последующим хроматографичеким разделением их в тонком слое сорбента, элюированием (извлечением вещества вымыванием подходящим растворителем - элюентом) и измерением оптической плотности полученных элюатов.

Реактивы и материалы: Стандартные растворы: раствор 1: отвешивают 100 мг бензойной кислоты, переносят в мерную колбу на 25 см3 и доводят до метки этилацетатом (концентрация полученного раствора 4 мг/см3); раствор 2: отвешивают 40 мг сорбиновой кислоты, переносят в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки этилацетатом (концентрация полученного раствора 0,4 мг/см3); раствор 3: смешивают равные объемы растворов 1 и 2. Концентрация БК в полученном растворе 2,0 мг/см3, СК — 0,2 мг/см3.

Na2SO4 безводный. H2SO4, 1 М и 0,5 М растворы. 1М NaOH. Этилацетат. Система растворителей: петролейный эфир : хлороформ : диэтиловый эфир : муравьиная кислота 20,0:8,0:2,8: 1,2. Реагенты для обнаружения сорбиновой и бензойной кислот в тонком слое: растворы хлорного железа, пероксида водорода, (K2Cr2O7+H2SO4) и 2-тиобарбитуровой кислоты. Элюент для высокожидкостной хроматографии— изооктан:диэтиловый эфир:уксусная кислота в соотношении (100:12:0,1).

Ход работы. Выделение бензойной и сорбиновой кислот. Пробу пищевого продукта (за исключением напитков) массой около 10,00 г измельчают и гомогенизируют с добавкой 25 г Na2SO4 и 40 см3 1 М раствора H2SO4. Полученную гомогенную массу переносят в колбу вместимостью 1 л, соединенную с парообразователем, и нагревают. В момент, когда жидкость в колбе начинает закипать, закрывают парообразователь пробкой и отгоняют БК и СК с паром, собирая около 80 см3 дистиллята в приемник, содержащий 10 см3 1 М раствора NaOH. Дистиллят переносят в делительную воронку, насыщают Na2SO4 (на 10 см3 дистиллята добавляют 6 г Na2SO4), подкисляют 1 М раствором H2SO4 до рН 2,0 .3,0 и экстрагируют этилацетатом трижды по 10 см3. Объединенный экстракт сушат, добавляя 2 г прокаленного безводного Na2SO4. Этот экстракт обозначают V1. Экстракт упаривают на роторном испарителе (допускается упаривание в фарфоровой чашке на песчаной бане) до объема 1 см3.

При анализе напитков исключают стадию отгонки, 10 см3 напитка разбавляют вдвое 0,5 М H2SO4, добавляя 10 г Na2SO4, интенсивно перемешивают и экстрагируют БК и СК 3 раза по 5 см3 этилацетатом. Объединенный экстракт V1 сушат 1 г безводного прокаленного Na2SO4. Экстракт упаривают на роторном испарителе или в фарфоровой чашке до конечного объема 1 см3. Хроматографическое разделение в тонком слое. Готовят смесь растворителей, включающую петролейный эфир, хлороформ, диэтиловый эфир и муравьиную кислоту в соотношении объемов 20,0:8,0:2,8:1,2 соответственно и заливают в камеру для тонкослойной хроматографии. Пластинку «Силуфол УФ 254» размечают мягким простым карандашом, определяя на линии старта 6 зон длиной 2 .3 мм для нанесения исследуемых растворов. На разметки 1, 2, 5, 6 наносят по 1, 2, 4 и 8 мкл раствора 3, при этом количество БК в них составляет 2, 4, 8 и 16 мкг, а СК — 0,2; 0,4; 0,8 и 1,6 мкг соответственно. На разметки 3 и 4 наносят 3 и 10 мкл экстракта. Нанесение проб проводят микрошприцем, калиброванным капилляром, постоянно подсушивая поддувом воздухом с помощью фена. Пластинку опускают в камеру и хроматографируют до 15 см от линии старта. Затем пластинку вынимают, подсушивают и рассматривают в УФ-свете с волной 254 нм. Наличие в хроматограмме экстракта темных пятен, совпадающих значению Rf соответствующим стандартам, свидетельствует о приcутствии этих консервантов в анализируемом образце. Пятна в экстракте сравнивают с пятнами стандартов визуально и ориентировочно оценивают содержание бензойной и сорбиновой кислот в пробе. Темные пятна в экстракте и стандартах обводят карандашом в УФ-свете. Идентификация и подтверждение наличия бензойной и сорбиновой кислот. Для обнаружения бензойной кислоты высушенную пластинку разрезают между 3 и 4 стартовыми зонами. Одну часть опрыскивают раствором хлорного железа, а затем — пероксида водорода и нагревают 2 минуты при 80 .100°С в сушильном шкафу. Появление буро - фиолетовой окраски пятен на хроматограмме экстракта, по цвету и Rf соответствующих пятнам в стандарте БК, подтверждает наличие БК в пробе. Для обнаружения сорбиновой кислоты вторую часть пластинки опрыскивают раствором К2Сг2О7 в H2SO4, подсушивают, опрыскивают раствором 2-тиобарбитуровой кислоты и нагревают 5 мин. при 100 °С в сушильном шкафу. Появление малиновой окраски пятен на хроматограмме экстракта, по цвету и Rf соответствующих пятнам и стандарте СК, подтверждает ее наличие в пробе. Количественное определение бензойной и сорбиновой кислот при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии. Экстракт, содержащий выделенные бензойную и сорбиновую кислоты, и раствор стандарта 3 поочередно вводят в жидкостный хроматограф «Милихром» с колонкой 60x2 мм, (неподвижная фаза — «Силасорб 600», 5 мкм) при следующих условиях работы: состав элюента — изооктан:диэтиловый эфир:уксусная кислота в соотношении 100:12:0,1, расход элюента 200 мкл/мин, детектирование в УФ-спектре при 254 нм, объем видимой пробы 10 мкл, скорость ленты самописца JIKC — 4300 мм/ч. Нa хроматограмме экстракта идентифицируют пики БК и СК по времени удерживания стандартов: для БК — 3,4 мин, для СК — 4,4 мин.