Na2HAsO4 + 15H2SO4 + 12(NH4)2MoO4 [в реактиве Нельсона]¾¾® (NH4)3H4[As(Mo2O7)6] + 21(NH4)2SO4 + Na2SO4 + 10H2O

2(NH4)3H4[As(Mo2O7)6] + Cu2O ¾¾® 4Mo6O17 + 2CuO +(NH4)2SO4 + 2(NH4)2HAsO4 + 3H2O

Оптическую плотность полученного раствора измеряют при 590 нм с использованием кюветы с шириной грани 5 мм.

2.Построение калибровочной кривой. Калибровочную кривую строят после проведения колориметрической реакции модельных растворов глюкозы с концентрацией от 0,02 до 0,14 мг/см3. Изучаемая зависимость выражается прямой линией, выходящей из начала координат.

Определение фруктозы и других кетосахаров (по Мак-Рери и Слаттери)

Определение основано на способности кетосахаров давать вишневую окраску с резорцином в кислой среде:

Реактивы и материалы: а) Спиртовой раствор резорцина

1 грезорцина растворить в 1 дм3 95%-ного этанола.

б) 30 %-ный раствор НС1 (не должен давать окраску с резорцином).

в) Стандартный раствор фруктозы

100 мг фруктозы растворяют в 100 см3 насыщенного водяного раствора бензойной кислоты.

г) Рабочий раствор фруктозы

1 см3 стандартного раствора фруктозы разводят в мерной колбе на 100 см3

Ход работы.В пробирку вносят 5 см3 испытуемого раствора (содержащего от 1 до 8 мг фруктозы в 100 см3 раствора), 5 см3 спиртового раствора резорцина и 15 см3 30 %-ного раствора НСI. Содержимое пробирки перемешивают и помещают на 20 минут в водяную баню при температуре 80 °С. Затем содержимое пробирки охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность на ФЭКе при 540 нм (зеленый светофильтр). В качестве контроля используют раствор, в котором вместо 5 см3 испытуемого раствора берется 5 см3 Н2О. Количество фруктозы определяют по калибровочной кривой. Для этого готовят серию разведений рабочего раствора фруктозы, в каждом из которых проводят определение фруктозы по описанной выше методике. Калибровочную кривую строят в координатах: «оптическая плотность — количество фруктозы, мг».

Газохроматографическое определение отдельных сахаров

Метод основан на переводе углеводов типа глюкозы, фруктозы, арабинозы, ксилозы, галактозы, сахарозы, мальтозы, лактозы, раффинозы, а также полиолов — сорбита и инозита в пищевых продуктах в триметилсилильные производные с последующей их идентификацией на газовом хроматографе.

Аппаратура, реактивы и материалы: а) Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором и устройством для программирования температуры. б) Стеклянная насадочная колонка длиной 2 .3 м и диаметром З .4 мм или капиллярная колонка длиной 25 .30 м с нанесенной фазой. в) Микрошприц емкостью 1,0 .10мкл. г) Роторный испаритель. д)Гексан, х.ч. е)Гексаметилдисилазан. ж) Трифторуксусная кислота или триметилхлорсилан. з) Пиридин, х.ч., безводный. и) Ксилит, х.ч. или инозит. й) Свинец уксуснокислый, х.ч. к) Неподвижные фазы для ГЖХ SE-30, OV-17, ХЕ-60, СКТФТ-50. л) Инертный носитель для ГЖХ: хромосорб-W DMCS, хроматон-N DMCS.

Ход работы.

1. Подготовка образцов к анализу углеводов. Для получения достоверных результатов анализа необходимо учитывать содержание жира и лимонной кислоты в испытуемом образце. Предварительно содержание этих компонентов в пищевых продуктах можно оценить по «Таблицам химического состава пищевых продуктов» и на основании этого выбрать один из следующих способов подготовки образца к анализу.

1.1. Продукты с низким содержанием жира (менее 1,5%).

1.1.1. Продукты с низким содержанием лимонной кислоты (менее 1,5 %). Содержание лимонной кислоты устанавливается по «Таблицам химического состава». К ним относятся соки, вина, пиво, фруктово-ягодные кондитерские изделия, мед, сиропы и др. Навеску гомогенизированной пробы продукта с высоким содержанием сухих веществ (более 60 %) наносят на полиэтиленовую пластинку в количестве 50 . 150 мг и взвешивают на аналитических весах с точностью 0,0001 г. На этой же пластинке взвешивают 5 . 10 мг ксилита. Пластинку помещают в круглодонную колбу емкостью 10 .25 см3 и силилируют без обезвоживания с использованием трифторуксусной кислоты. При использовании триметилхлорсилана содержимое колбы упаривают досуха на роторном испарителе при 60 "С под вакуумом. В случае медленного упаривания в колбу добавляют 1 см3 бензола. После упаривания проводят силилирование. Жидкие продукты отмеряют пипеткой в количестве 0,5 . 1,0 см3 и помещают в круглодонную колбу емкостью 10 .25 см3, снабженную шлифом. Туда же на полиэтиленовой пластинке вносят навеску 5 . 10 мг ксилита, взвешенного с точностью 0,0001 г. Содержимое колбы упаривают досуха на роторном испарителе.

1.1.2. Продукты с содержанием лимонной кислоты более 1,5 %. Для исключения наложения пика ТМС-производного лимонной кислоты на ТМС-производное (3-глюкозы, лимонную кислоту осаждают уксуснокислым свинцом. Навеску средней гомогенизированной пробы продукта (свежие цитрусовые плоды, цитрусовые соки, продукты, содержащие лимонную кислоту как пищевую или консервирующую добавку) в количестве 1 .1,5г взвешивают с точностью до 0,0001 г в конической колбе емкостью 100 см3, приливают 30 см3 75 .80 %-ного раствора этанола и экстрагируют 30 минут при температуре 60 .70°С. Используют водяную баню и обратный холодильник. Экстракцию повторяют трижды, экстракты объединяют. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой. В центрифужную пробирку на 10 см3 вносят пипеткой 5 см3 отфильтрованного экстракта, 0,5 см3 насыщенного раствора уксуснокислого свинца. Осадок центрифугируют. 1 см3 надосадочной жидкости переносят в круглодонную колбу со шлифом емкостью 10 .25 см3. Туда же на полиэтиленовой пластинке вносят навеску ксилита 5 . 10 мг. Содержимое колбы упаривают на роторном испарителе при 60 "С под вакуумом.

1.2. Продукты с высоким содержанием жира (более 1,5%).

1.2.1. Продукты с содержанием лимонной кислоты менее 1,5 % (детское молочное питание, сухие молочные смеси и др.). Навеску средней гомогенизированной пробы продукта с высоким содержанием сухих веществ (более 60%) в количестве 500 .1000 мг помещают в центрифужную пробирку. Туда же на полиэтиленовой пластинке вносят с точностью до 0,0001 г навеску ксилита 2 .5 мг. Проводят экстракцию с 2 см3 гексана с последующим центрифугированием. Экстракцию проводят трижды, декантируя гексановый слой. Остатки гексана высушиваются в токе азота, после чего проводят силилирование.

Пробу сгущенного молока взвешивают в центрифужной пробирке и проводят обезжиривание, как описано выше, затем добавляют 20 см3 50 %-ного водного раствора этанола, тщательно перемешивают, затем обрабатывают аналогично жидким молочным продуктам.

10 см3 жидких молочных продуктов помещают в центрифужную пробирку, смешивают с 10 см3 96 %-ного этанола, выдерживают 30 .40 минут и центрифугируют при 4000 об/мин в течение 10 минут. 1 см3 надосадочной жидкости помещают в круглодонную колбу, туда же на полиэтиленовой пластинке вносят 2 .5 мг ксилита, содержимое упаривают насухо на роторном испарителе при 60 °С, после чего проводят силилирование.